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澳门威威尼斯棋牌大乐小讲堂丨代谢组学的那些事(三)

2023-01-28 17:56:58

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01
基质效应是什么?

基质效应(matrix effect)是指标本中除分析物以外的物质(基质)对分析物的分析过程有显著的干扰,并影响分析结果的准确性。

02
基于液相色谱-质谱(LC-MS)方法分析生物样本过程中的基质效应

在基于液相色谱-质谱(LC-MS)的方法分析生物样本的过程中,很多物质都可能产生基质效应。根据基质物质的来源可分为内源性与外源性两大类。内源性:通常是生物样本中的无机物、有机物(如蛋白质,脂肪,磷脂等),可能还包括体内所形成的一些代谢产物;外源性:来自于样品制备过程或者样本处理中引入的外来物质。
目前,研究者们普遍认为,基质效应主要是在质谱离子源的离子化过程中产生,由于基质物质与目标化合物竞争电荷和中和离子化所致。因此,需要选择与待测物化学性质一致的同位素内标,用于抵消在样品的提取和离子化过程中产生的基质效应。
03
为什么有些代谢物的检测需要衍生化?
主要是为了改善目标物的响应、极性、稳定性和分离性能。如含胺基的物质,可采用丹磺酰氯进行衍生化,其含有的疏水基团可使亲水性化合物能够在反相色谱柱上得到有效保留和分离,提高检测性能,而叔胺的共轭结构能稳定正电荷,增强代谢物的电喷雾离子化效率,从而提升其检测的灵敏度。
04
内标是如何抵消基质效应带来的影响?

基于液相-质谱(LC-MS)的方法分析生物样本的过程中,如果内标和待测物受到同样程度的抑制和增强的影响,离子化条件的改变只会影响到峰面积的绝对值,而不会影响待测物和内标的比值,因此可以用内标抵消基质效应的影响。

为了最大程度的抵消和降低基质效应,内标应当具有与待测物类似的物理化学性质、相同的离子化效率和色谱保留时间,因此,优先选择待测物质的同位素标记内标。

05
有标准品就可以进行定量检测么?
有标准品不一定可以进行定量检测。虽然具备标准品是定性和绝对定量的必需条件,但是要从生物样本中检测到目标代谢物,还需要建立合适的方法(样品制备、色谱分离、质谱检测等),整个过程需要有丰富方法开发的工作者投入大量时间来完成,即便满足了上述条件,方法开发也依旧有失败的风险,如目标物质极不稳定。


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